产品目录

本产品是可高效提取组织miRNA的专门试剂盒。采用独特的消化配方，先去除较大分子的DNA和rRNA，再使用miRNA富集技术，使组织miRNA聚集起来，使之更容易被核酸纯化膜吸附纯化，与部分同类试剂盒相比，显著提升了miRNA的提取效率。DIOG组织miRNA提取试剂盒各组分经反复优化，操作也非常简便，只需30多分钟即可获得理想的提取结果。

• 采用独特的消化技术，去除较大分子的DNA和rRNA，使miRNA更容易分离提取；
  
• 采用miRNA富集技术，使组织miRNA聚集起来，使之更容易被核酸纯化膜吸附纯化，大幅提升miRNA的提取效率；
  
• 操作简便，只需30多分钟即可获得理想的miRNA提取结果。

• 请准备：无水乙醇、PH7.5 PBS溶液、1.5mL RNA-Free离心管、液氮、研钵。
  
• 取出洗涤液，按85%比例加入无水乙醇，1.5mL加入8.5mL无水乙醇，充分混匀。
  
• 组织处理：
  
  • 取10～20mg左右的组织，用液氮研磨为粉末，转入1.5mL RNA-Free离心管内，加入50μL PH7.5 PBS溶液，振荡混匀。
    再加入150μL DIOG裂解液，20μL DIOG消化液，65度温育10分钟。
    
  • 也可在组织匀浆器中加入200μL DIOG裂解液，放入10～20mg组织，充分匀浆至无肉眼可见组织碎块，再加入20μL DIOG消化液，充分混匀，65℃温育12分钟（如组织匀浆不充分，可适当延长消化时间至无肉眼可见组织块）。
• 加入0.22mL miRNA释放剂，充分振荡混匀，室温放置2分钟；
  
• 13000rpm离心5分钟，将400μL上清液转移到1支新的1.5mL RNA-Free离心管；
  
• 向上清中加入5μL miRNA富集剂，再加入300μL无水乙醇，充分混匀，静置2分钟；
  
• 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，13000rpm离心1分钟，弃收集管内废液。
  
• 将吸附柱放回收集管内，加600μL洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，13000rpm离心1分钟，弃收集管内废液。
  
• 按每份样本30μL取洗脱液（如10份提取样本，即取300μL洗脱液），放置于灭菌RNA-Free离心管，65℃预热。
  
• 将吸附柱放回收集管内，13000rpm离心2分钟，离去残留的乙醇。
  
• 取出吸附柱，放入新的1.5mL RNA-Free离心管，开盖放置2分钟，挥发乙醇。
  
• 加入30μL预热的洗脱液，静置2分钟，12000rpm离心1分钟，收集miRNA溶液。

• 裂解液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。
  
• 由于RNA容易降解，提取实验所用器具应除去RNA酶，实验过程中最好戴一次性洁净手套、口罩，提取的RNA溶液可适当加入RNA保护因子（一般50μL RNA溶液加入2μL。）
  
• 洗涤液加入乙醇后要充分混匀，最好现用现配，每次根据所要提取的样本量计算后适量配制。